Protoplastos.

 Sobre Los Protoplastos.

El término Protoplastos se refiere a componentes vivos de células vegetales que están rodeados solo por la membrana plasmática, es decir, constituyen células desnudas de la planta.

Muchos protoplastos pueden resintetizar la pared celular, dividirse, formar colonias e incluso regenerar plantas. La capacidad para producir un organismo altamente diferenciado, a partir de una sola célula somática, es una característica única de los protoplastos de plantas superiores.

Cocking (1960)  fue quien utilizo por primera vez degradantes de pared celular para aislar protoplastos de plantas superiores; usando una preparación de celulasa cruda de hongo Myrothecium varrucaria, este investigador aisló protoplastos de raíces de tomate.

Aislamiento de protoplastos.

Aunque existe un método mecánico para aislar protoplastos, el método enzimático es actualmente la forma más importante y efectiva para ese propósito.

El método mecánico tiene, ante todo, un interés histórico, ya que su rendimiento es bajo, su procedimiento tedioso y su aplicabilidad limitada (Vasil et al, 1980).

Consiste en aplicar un choque osmótico para producir plasmólisis en las células, las cuales se rompen mediante un corte; luego se pueden liberar los protoplastos de las células rotas mediante el restablecimiento de su nivel osmótico.

Los principales factores a tomar en cuenta para el éxito de este método son:

• El tipo de enzima que usarán.
• La composición del medio en que ellas actuarán.
• El material de origen de los protoplastos.

Enzimas para el aislamiento de protoplastos.

Es necesario usar mezclas de enzimas. Se utilizan enzimas de las siguientes clases generales: celulosas, hemicelulasas y pectinasas.

 

 

Medio de incubación.

El material de incubación que se utiliza para el aislamiento de protoplastos consta de los siguientes elementos; enzimas disueltas en una solución que contenga algunas sales, un medio de cultivo, un amortiguador (solución tampón), y un estabilizador o regulador osmótico. El calcio es un ingrediente esencial y el ion fosfato.

 

Fuentes para la obtención de protoplastos.

En general, es posible aislar protoplastos de cualquier tipo de planta, órgano o tejido, pero las fuentes que se usan corrientemente son mesófilo foliar y tejidos cultivados in vitrocomo células en suspensión, callos, y ápices de plántulas generadas in vitro (Ruesink, 1980; Vasil et al, 1980a.)

El mesófilo como fuente de protoplastos: el estado fisiológico del tejido foliar influye sustancialmente en el rendimiento y viabilidad de los protoplastos. Para liberar protoplastos de buena calidad, las plantas se deben cultivar en condiciones controladas (invernadero, cámara de crecimiento), donde se puedan optimizar la luz, la temperatura, la fertilidad del suelo y la humedad.

 

Las suspensiones celulares como fuente de protoplastos: Debido a que las suspensiones son heterogéneas y a menudo están compuestas de agregados de diferentes tamaños y de células libres, no todas las células están en condiciones óptimas para la liberación de protoplastos; la liberación en este caso depende también de las condiciones de crecimiento de las células cultivadas.

Características de los protoplastos aislados.

Las poblaciones de protoplastos recién aislados reflejan las propiedades morfológicas y fisiológicas de las células de las cuales se derivan, y representan por tanto un material útil para los experimentos bioquímicos y fisiológicos (Galun, 1981).

Dado que los tejidos de la planta constan generalmente de diferentes tipos de células, las poblaciones de protoplastos aislados conservan la heterogeneidad del tejido original (Magnien et al, 1982); estas poblaciones mixtas de protoplastos se pueden reagrupar, por centrifugación, en gradientes iso-osmóticos de densidad (Harms et al.,1978; Fitzsimon et al,.1983; Nomura et al.,1982) o clasificarse pro flujo y citometría.