Cultivo de meristemos.

Sobre el cultivo de Meristemos. 

Como ya sabemos las técnicas de cultivo in vitro son un avance biotecnológico en el que se reúnen y controlan los factores necesarios para una propagación o multiplicación de una especie vegetal en un medio de cultivo.

El cultivo de tejidos in vitro comprende una serie de técnicas mediante las cuales un explante (porción de tejido u órgano que se retira del resto de la planta) se cultiva en un medio de composición química definida en condiciones ambientales controladas (Razdan, 2003)

Los factores que se deben tener en cuenta para obtener una respuesta adecuada del explante, incluyen: la posición en la planta donadora, edad ontogenética y estado fisiológico de la misma.  Adicionalmente se debe considerar la especie con la que se esté trabajando y los objetivos que se buscan. Uno de estos, es el uso de meristemos apicales para la producción de plantas libres de virus.

Una vez obtenidos los meristemos se proceden a la siembra en un medio de cultivo, con el cual se busca el crecimiento y la regeneración de estos mediante el aporte de nutrientes.

El medio de cultivo usa los macronutrientes más utilizados como:

·         Nitrógeno.

·         Fósforo.

·         Potasio.

·         Calcio.

·         Magnesio.

·         Azufre.

Micronutrientes:

•          Boro.

•          Cobalto.

•          Manganeso.

•          Hierro.

•          Zinc.

•          Molibdeno.

•          Ácido nicotínico.

Compuestos orgánicos:

·         Tiamina.

·         Piridoxina.

Fuente de carbono.

·         Generalmente sacarosa.

Reguladores de crecimiento.

Dentro de los factores físicos a tener en cuenta se incluyen la luz, temperatura y la humedad relativa.

Un último aspecto a tomar en cuenta es la composición de gases dentro del recipiente. Los principales son etileno, oxigeno, dióxido de carbono, y acetaldehído. Los efectos producidos por estos gases afectan la morfogénesis, promoviendo crecimientos celulares anormales.

Etapas de cultivo de meristemos in vitro:

Etapa 0: Etapa preparativa.

Consiste en clasificar el material que se encuentra en condiciones fisiológicas y fitosanitarias adecuadas.

Etapa 1: Establecimiento del explante.

Las plantas donadoras de explantes deben someterse a una desinfestación superficial, con productos químicos que sean tóxicos para los microorganismos, puesto que si no se eliminan podrían competir con el crecimiento y desarrollo del explante in vitro (Debergh & Zimmerman).

Durante la etapa de establecimiento, el explante pasa por un periodo inicial, donde se estabiliza después del estrés producido por el aislamiento de la planta donadora y por los tratamientos de desinfestación. De esta manera, se espera que ocurra un crecimiento resultado de la división y elongación celular. (Smith, 1992).

Etapa 2: Multiplicación y elongación de brotes.

Tiene como objetivo la multiplicación de los brotes obtenidos a partir del meristemo. Por lo general, el medio de cultivo es similar al de la fase de establecimiento y es común utilizar citoquininas con el propósito de estimular la división celular e inhibir la dominancia apical para lograr el crecimiento de brotes.

El número de subcultivos y la composición del medio de cultivo pueden afectar la estabilidad genética y la tasa de multiplicación de las plantas obtenidas. (Hartmann et al, 1997).

Etapa 3: Etapa Enraizamiento In vitro.

Los brotes obtenidos son sometidos a condiciones de enraizamiento y preparados para ser transportados ex vitro. Para este procedimiento se debe transferir por unos días a un medio de cultivo sin reguladores de crecimiento y posteriormente se subcultivan en medio para la inducción de raíces in vitro.

Etapa 4: Aclimatación del material obtenido in vitro.

Es la etapa conocida como endurecimiento, proceso mediante el cual las plantas obtenidas en condiciones in vitro se transfieren gradualmente a un ambiente ex vitro.